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A549-DDP細胞培養說明書
更新時間:2018-08-13 點擊量:2652

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)

貨號:HRCL-031/DDP

 

細胞介紹

這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。

 

細胞特性

1) 來源:肺癌

2) 形態上皮細胞

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,1000RPM,常溫條件離心5min后潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

 

細胞用途:僅供科研使用。

                       

細胞培養步驟

一. 培養基培養凍存條件準備:

注意客戶收到細胞后按照下面的要求操作:培養瓶里面的培養液是不含藥物的。待細胞長到 70-80%的匯合度時,去掉培養液,加入含 500ng/ml DDP藥物的培養液,放入培養箱,這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來,但是不要緊,通過換液可以去掉,下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了,這時可以一直用含藥培養液來消化培養細胞,一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml,含藥培養液用于細胞培養都沒問題的,凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。

1) 準備1640培養基(Gibco),90%;胎牛血清,10%,添加PS,1%,1~2ug/ml DDP

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%*培養基,10%DMSO現用液氮儲存。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化

3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中

3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

滬公網安備 31011802001677號

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