免疫酶技術ELISA法是一項先進的免疫化學測定技術,自20世紀60年中期問世70年代初發展以來,引起了許多學者有關技術人員的重視。這是因為免疫酶技術有其*的優點.
免疫酶標固相載體方法,根據固相載體的不同,一般分為三類,即酶聯免疫吸附測定(ELISA)和*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,簡稱DASS)體系測定。后來又發展出纖維素薄膜作為載體的ELISA檢測法,俗稱Dot-ELISA.。ELISA和Dot-ELISA的差別主要是所用載體不同,由于纖維素薄膜比聚苯乙烯具有更多的優點,因此目前Dot-ELISA的使用越來越廣泛。
一,固相載體
任何適用于放射免疫測定的固相載體(也稱為固體相),均可用于免疫酶標固相載體的方法中。
免疫酶技術中使用的固相載體一般分為兩類,一類是具有疏松結構的小球狀物質,另一類是塑料平板或管。
小球狀物載體
在免疫酶技術中,使用zui早的疏松的小球狀物載體是微晶纖維素(Micro-crystalline Cellulose),后來逐漸使用瓊脂糖珠(Sepharose 4B),形成*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,簡稱DASS)體系。瓊脂糖珠經活化后,抗體或抗原蛋白質是通過共價鍵與小珠結合的,結合方式如下:
通過CNBr共價偶合的抗原或抗體形成的結合物是穩定的,但是在一系列處理過程中,操作復雜,標記酶容易失活,影響實驗結果的因素較多,加之在測定過程中,分離和清洗懸浮小珠要經多次離心,步驟繁瑣,因此實際應用較少。
另外,有人曾將聚丙烯酰胺凝膠(Biogel P-300)和一定孔徑的玻璃珠(Controlled Poreglass)作為固相載體。
也有人用乙酰氯甲酸鹽(Ethylchloroformate)和戊二醛作為聚合劑,使免疫反應物相互交聯而成為固態。
Kamefusa等發現,硅碎片(Silicon Pieces)作為載體,物理吸附穩定,制作簡易且價格低廉。
大多數小球狀物載體很難適合于免疫酶技術的大規模檢測。
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