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NF-KB p65活性檢測實驗

NF-KB p65活性檢測實驗

產品型號:

所屬分類:酶活性檢測實驗

產品時間:2024-08-30

簡要描述:[平臺項目開展范圍]慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務。

詳細說明:

NF-KB p65活性檢測實驗

 

 

 

核轉錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉錄因子,參與調控多種與炎癥、抗凋亡、

腫瘤形成和轉化有關的基因表達。NF- kappaB (NF _kB)初被鑒定為在B細胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強子結合。但隨后在非B-細胞的細胞質中被發現,形成NF-KB和kB的復合物。初在DNA結合蛋白復臺物中分離的NF _kB是由p65(ReIA)和p50構成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68,p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結合活力,但只具有微量的反式激活作用。據報道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉錄活力的異源雙體,類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細胞質中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調節。

 

IkB和p65單體結合,阻制了細胞核中的定位和DNA的結合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體,能和DNA微弱地結合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應(14) 。p49和p50也能形 成同源雙聚體,但在細胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實驗時,在20ul的反應體積中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油,0.05%NP-40。當用純化的蛋白時,250-300ng足以形成凝膠遷移復合物, 而需用10ug的Hel a細胞核抽提物。凝膠遷移復合物在室溫中保溫30分鐘,在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍色素的加樣溶液只能加入到陰性對照反應中,因這兩種色素會加劇NF-kB復合物的解離。當用Hel a細胞核抽提物作為結合蛋白來源時,可形成兩種序列特異的凝膠遷移復合物,即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達p49,p50, p65的細胞中, 可檢測到4個序例特異的凝膠遷移復合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高濃度的p65,可檢測到微量的p65/p65.

 

下列試劑可加強NF- kB在體外的結合: mM的GTP, ATP, 精胺,亞精胺,鋇或鈣離子,ng的

Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細胞核蛋白,利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細胞核蛋白并加以區分,通過酶標儀450nm處測定核蛋白標準品與NF -Kb p65吸光度值,進行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗



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