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石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

產品型號:

所屬分類:病理學檢測實驗

產品時間:2024-08-30

簡要描述:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
客戶提供固定組織
1.實驗周期: 1-2周
2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)

詳細說明:

服務名稱:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

提供商:上海研研謹生物

規格:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡


TUNEL凋亡顯色法

TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發生凋亡時,DNA內切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)

加上帶有生物素(Biotin) 標記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的streptavidin結合, 在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞,從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到細胞凋亡。


實驗意義

1. TUNEL法是一種分子生物學 與形態學相結合的研究方法,可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色,可以準確反映細胞凋亡典型的生物化學和形態特征。

2.可用于石蠟切片冰凍切片培養的細胞等進行細胞凋亡檢測,靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。

3.操作簡便快捷,在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。


實驗步驟


1.石蠟切片TUNEL顯色法:

①石蠟切片常規脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液37°C反應15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥加入適量TdT酶反應液,暗濕盒中37°C反應1 h,用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H202封閉內源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反應30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數次;

10選擇是否用DAPI復染細胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。


2.冰凍切片TUNEL顯色法:

①新鮮組織經處理后,立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 um;

②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12 h;

③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;

④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;

⑥加入適量TdT酶反應液,暗濕盒中37°C反應1 h,用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H2O2封閉內源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反應30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數次:

@選擇是否用DAPI復染細胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。

實驗完成周期及交付標準

1.實驗周期: 1-2周

2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)


需確認的信息

1.樣本的種屬.

2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)

3.是否提供試劑盒

4.拍照要求


收費標準服務周期提供結果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。

更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詢!


實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取


蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗


免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗




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