目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中磷酸化AKT蛋白(P-AKT)含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)水平。用純化的小鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入磷酸化AKT蛋白(P-AKT),再與HRP標記的磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸化AKT蛋白(P-AKT)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)濃度。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
檢測范圍:
5 ng/L -150 ng/L
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月